换一批乙型脑炎病毒SA1444-2株E蛋白C端片段的克隆及原核表达
Clone of C-terminal Fragment of SA14-14-2 Strain of Japanese Encephalitis Virus E Protein and its Expression in Escherichia coli
摘要[目的]为进一步研制检测乙脑抗体试剂盒奠定了基础.[方法]以本实验室已构建的重组质粒pET-E(E为乙脑疫苗株SA14-14-2株E蛋白)为模板,利用PCR扩增乙型脑炎病毒E蛋白基因3'端部分片段,克隆入原核表达栽体pET-32a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE电泳分析表达产物.[结果]所表达的融合蛋白分子量约为38KD,表达产物以水溶形式存在,37℃,诱导4 h的诱导培养条件最佳,表达量约占菌体总蛋白的20%.表达产物经Ni-NTA亲和层析法纯化,获得了纯度较高的目的蛋白.ELISA检测表明,表达的蛋白能与猪乙脑病毒抗体血清发生特异性反应,具有很好的抗原性.[结论]基因工程表达的JEV E蛋白有望成为重要的实验室诊断抗原.
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