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hTERT核心启动子驱动的条件复制型腺病毒载体的构建及鉴定

Construction and verification of a novel CRAd driven by hTERT promoter

摘要:

目的构建并鉴定一种新型人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子驱动的条件复制型腺病毒载体.方法采用PCR的方法克隆腺病毒E1区基因(E1A, E1B55K)、E1B的启动子(E1Bp)以及人端粒酶逆转录酶亚基启动子(hTERTp),以及2个目的基因:人GM-CSF和GFP(Green Fluorescence Protein, GFP).采用一系列分子生物学方法构建pShuttle-GFPSV55K穿梭质粒,应用此穿梭质粒与AdEasy-1腺病毒DNA在BJ5183细菌内重组得到重组腺病毒质粒,将其转染293细胞获得Ad-GFPSV55K重组腺病毒.PCR法鉴定重组腺病毒,噬斑形成实验测病毒滴度.结果经过酶切鉴定成功地构建了分别携带GM-CSF基因和GFP报告基因的腺病毒载体,病毒滴度为7×1010 pfu/ml.结论成功获得由hTERT启动子驱动的条件复制型腺病毒载体,为肿瘤的基因治疗打下良好的基础.

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作者: 倪芳 [1] 鲁茁壮 [2] 瞿成奎 [1] 胡泽斌 [2] 王立生 [2] 汪思应 [1]
期刊: 《安徽医科大学学报》2006年41卷1期 19-22页 ISTICPKUCA
分类号: R345.9R373.1R341
栏目名称: 基础医学研究
DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2006.01.007
发布时间: 2006-04-13
基金项目:
科技部科研项目 中国科学院资助项目 安徽省人才基金
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