换一批
换一批摘要目的 克隆人脂联素(hAPM)基因及构建真核表达重组体PGEX-4T-1/hAPM cDNA,诱导表达谷胱甘肽巯基转移酶-hAPM(GST-hAPM)融合蛋白.方法 应用RT-PCR法从中国汉族人大网膜脂肪垫总RNA中扩增出APM cDNA全长基因,并在基因上下游分别克隆上EcoR1、Sal1两个酶切位点,将其定向导入PGEX-4T-1多克隆位点,构建PGEX-4T-1/hAPM融合表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)后进行诱导表达.结果 从脂肪组织总RNA中扩增得到760 bp片段APM基因,经双酶切鉴定及测序分析,证明hAPM cD-NA已克隆到PGEX-4T-1载体中.免疫印迹证实,诱导表达的融合蛋白可被多克隆抗体Acrp30(N-20)-R识别.结论 成功诱导表达出融合蛋白GST-hAPM,为进一步获得大量可供实验研究和临床应用的重组hAPM创造条件.
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DOI
10.3969/j.issn.1000-1492.2006.05.014
发布时间
2006-12-04
基金项目
安徽省自然科学基金（03043719）；
安徽省教育厅自然科学基金（2006KJ089A）
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