换一批
换一批酵母双杂交技术筛选细胞极化蛋白PALS1的结合蛋白
Screening of proteins interacting with cellular polar protein PALS1 by yeast two-hybrid system
摘要目的 筛选细胞极化蛋白PALS1的结合蛋白,进一步探讨PALS1的功能及其分子机制.方法 将PALS1的全长cDNA序列克隆到载体pGBKT7中,重组的pGBKT7-PALS1质粒转入酵母AH 109细胞,细胞置于SD/-Trp培养基上生长,阳性细胞再用Hela细胞的cDNA文库质粒转化,生长于SD/-Trp/-Leu/-His/X-α-gal,显蓝色的克隆为阳性.阳性克隆细胞中的DNA被抽提后转化细菌细胞,然后抽提DNA进行酶切分型.合适的类型测序后进行BLAST检索分析.结果 筛选到了13个阳性克隆,其中有2个是已知蛋白的基因即ATRAP和GLT28D1.结论 利用酵母双杂交系统成功克隆了PALS1的结合蛋白的基因,为进一步研究PALS1蛋白的功能提供了有益的启示.
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分类号
R341.3
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1000-1492.2007.02.010
发布时间
2007-06-18
基金项目
安徽省教育厅自然科学基金（2003kj189）；
安徽医科大学校科研和教改项目
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