换一批
换一批摘要目的 构建人His-tau和GST-tau融合蛋白表达质粒并在大肠杆菌中诱导表达及纯化.方法 以质粒pEGFP-tau为模板通过PCR扩增出人tau全长cDNA,并构建到原核表达载体pET28a和pGEX-5X-1中,挑选阳性重组子,经限制性内切酶鉴定后转化到大肠杆菌BL21中,然后用IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE染色及Western-blot方法鉴定表达的融合蛋白.分别使用His Bind Resin和Glutathione Sepharose 4B与融合蛋白结合来纯化融合蛋白.结果 成功构建原核表达质粒pET28a-tau和pGEX-5X-1-tau并在大肠杆菌BL21中诱导其大量表达.经His Bind Resin和Glutathione Sepharose 4B纯化后,可以得到较纯化的His-tau和GST-tau融合蛋白.SDS-PAGE及Western-blot分析显示,特异性的抗tau单克隆抗体(tau-5)所识别的融合蛋白分子量与理论值相近.结论 构建了人tau两种原核表达的融合蛋白质粒,并高效表达和纯化了该蛋白,为进一步的tau与其它功能性蛋白的相互作用研究奠定了基础.
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栏目名称
基础医学研究
DOI
10.3969/j.issn.1000-1492.2007.04.005
发布时间
2007-10-29
基金项目
教育部跨世纪优秀人才培养计划
教育部科学技术研究项目
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