HIV-1 HXB2株Tat蛋白在大肠杆菌中的分段表达及免疫原性分析

Segmentative expression of HIV-1 HXB2 subtype tat protein in E.coli and immunogenicity analysis of expressed peptides

二维码有效期 120s

摘要目的研究对人类免疫缺陷病毒Ⅰ型HXB2株调控蛋白Tat原核表达产生影响的区域和Tat蛋白重要的抗原表位.方法用PCR方法获得Tat(1-48aa)、Tat(22-72aa)和Tat(38-101aa)DNA片段,构建其原核表达质粒pET32a-Tat(1-48aa)、pET32a-Tat(22-72aa)和pET32a-Tat(38-101aa),并转入E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达及纯化,SDS-PAGE鉴定表达及纯化产物.采用间接ELISA方法用兔抗pET32a-Tat抗血清对三种肽段进行免疫原性分析.结果成功构建了pET32a-Tat(1-48aa)、pET32a-Tat(22-72aa)和pET32a-Tat(38-101aa)质粒,分别表达出相对分子质量(Mr)为23×103、23×103和25×103的融合肽段,其浓度分别为4.26、3.35和5.11mg/ml.间接ELISA结果表明三种融合肽段与兔抗pET32a-Tat抗血清均呈特异性结合反应,其抗体滴度分别为1:128 000、1:32 000、1:64 000,而抗血清与pET32a蛋白仅有较弱结合.结论半胱氨酸富集区(22-37位氨基酸)对Tat蛋白的原核表达有较显著影响;Tat蛋白的N端区、碱性区和C端区是其重要的抗原表位,其中N端区的免疫原性最强.