突变人干扰素-α2b基因5'端提高其在大肠杆菌中的表达

High-level expression of recombinant human interferon-α2b in Escherichia coli by mutating its 5' end

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摘要目的对人干扰素-α2b(hIFN-ao2b)基因的5'端进行突变,构建重组人干扰素-α2b(rhIFN-α2b)原核高表达工程菌,以提高rhIFN-α2b的表达水平.方法依据大肠杆菌密码子偏好性,在不改变hIFN-α2b的氨基酸序列的情况下,定点突变hIFN-α2b基因5'端序列并PCR扩增出rhIFN-α2b',克隆至温控型表达载体pJW2,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性重组子,温度诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE、Westernblot鉴定分析并以WISH-VSV系统检测其抗病毒活性.结果 SDS-PAGE分析表明rhIFN-α2b表达量约占菌体总蛋白20.6%,Westem blot表明rhIFN-α2b具有与hIFN-α2b相同的免疫原性,WISH细胞-VSV病毒系统证实其比活性达1.2×108 IU/mg,与未突变工程菌一致.结论突变hIFN-α2b基因5'端可以提高其表达水平,并成功构建出rhIFN-α2b原核高表达工程菌.

作者王参军 ^[1] 邹文艺 ^[2] 张玲 ^[3] 范清林 ^[2] 宋礼华 ^[4] 学术成果认领

作者单位安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室,合肥,230032 ^[1] 安徽安科生物工程(集团)股份有限公司,合肥,230088 ^[2] 安徽大学生命科学学院,合肥,230039 ^[3] 安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室,合肥230032;安徽安科生物工程(集团)股份有限公司,合肥,230088 ^[4]

关键词突变干扰素-α2b 基因表达大肠杆菌

主题词突变(Mutation)干扰素α(Interferon-alpha)大肠杆菌(Escherichia coli)基因(Genes)人(Persons)

分类号 R392.2 R343.9 R37-33

栏目名称 基础医学研究

DOI 10.3969/j.issn.1000-1492.2010.02.005

发布时间 2010-06-12

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