换一批
换一批pmCherry-N1-WWOX真核表达载体的构建及其在胆管癌细胞QBC939中的表达
Construction and identification of pmCherry-N1-WWOX eukaryotic vector and its expression in cholangiocarcinoma cell line QBC939
摘要目的 构建人脆性位点抑癌基因WWOX真核表达载体,并观察其在人胆管癌细胞株QBC939中的表达.方法 通过全基因合成的WWOX cDNA为模版,用PCR技术扩增,将扩增片段连接到PUC57质粒,构建克隆载体,鉴定出阳性克隆后用 DNA测序法鉴定重组质粒.将克隆载体与pmCherry-N1同时用Xho I/BamH I双酶切,构建真核表达载体pmCherry-N1-WWOX,以重组质粒转染QBC939细胞,通过Western blot检测转染细胞中WWOX的表达.结果 成功扩增WWOX基因片段,重组质粒的酶切鉴定及测序结果均证明WWOX基因成功克隆到真核表达载体中,Western blot结果证实转染重组质粒后的QBC939细胞WWOX蛋白表达增强.结论 成功构建出含人WWOX基因的真核表达质粒,并将重组质粒pmCherry-N1-WWOX转染到QBC939细胞,为研究WWOX基因在肿瘤发生、发展中的作用提供了有效的分子工具.
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DOI
10.3969/j.issn.1000-1492.2011.04.007
发布时间
2011-05-04
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