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大鼠骨髓间充质干细胞体外培养及CM-DiI标记的实验研究

Study on cultivation and CM-DiI labeling of rat bone mesenchymal stem cells in vitro

摘要:

目的 建立骨髓间充质干细胞(MSCs)的体外分离纯化、扩增以及标记的方法,为后期体内实验提供依据.方法 采用全骨髓培养和差速贴壁法分离纯化MSCs,培养期间观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞周期和表面标记物,成脂成骨分化诱导鉴定.MSCs经氯甲基苯甲酰氨荧光染料(CM-DiI)标记后,荧光显微镜观察荧光标记情况,流式细胞仪检测标记率,并通过绘制生长曲线明确CM-DiI对MSCs生长增殖的影响.结果 MSCs接种24~48 h后,贴壁细胞多为圆形、多角形、梭形,传至第3代时形态呈均一的长梭形.第3代MSCs高表达CD44,低表达CD106,不表达CD11b、CD45,85%以上细胞处于G0/G1期;成脂成骨诱导分别经油红O和茜素红染色均呈阳性.CM-DiI标记后荧光显微镜下细胞呈红色荧光,体外培养2周荧光未见明显减弱;流式细胞术检测显示标记率达95%以上,标记后细胞生长增殖不受影响.结论 通过全骨髓贴壁法及其扩增后可获得大量纯度较高的间充质干细胞,CM-DiI标记是一种简单、稳定、无毒的细胞标记方法.

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作者: 毛雨红 [1] 莫碧文 [1] 李劳冬 [1] 李洁 [1] 王孝养 [2] 韦江红 [1] 黄剑伟 [1] 徐青 [1]
期刊: 《安徽医科大学学报》2013年48卷6期 607-611页 ISTICPKUCA
分类号: R457.7
栏目名称: 基础医学研究
发布时间: 2013-07-19
基金项目:
国家自然科学基金 广西自然科学基金重点课题 广西科学研究与技术开发计划课题 广西卫生厅重点课题 广西青年科学基金
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