换一批
换一批HBV核心蛋白突变体L60 V重组质粒的构建及其应用于IFN-α抗病毒机制
Recombinant plasmidconstruction of L60 V mutant core proteins of HBV and the study of its role in antiviral mechanism of interferon-α
摘要目的构建乙型肝炎病毒核心蛋白( HBc )突变体L60V重组质粒,并探讨L60V拮抗α干扰素( IFN-α)抗病毒活性的机制。方法构建HBc突变体融合表达载体pEGFP-L60V,转染人肝胚瘤细胞株 HepG2细胞,荧光显微镜及Western blot 法检测其在细胞中的表达；并以 RT-PCR 及Western blot法检测JAK-STAT信号转导途径分子及抗病毒蛋白表达。结果经酶切和测序分析,成功构建HBc突变体L60V重组质粒；将L60V和HBc野生株表达质粒( pEG-FP-WT)分别转染 HepG2细胞后,以1000 IU/ml IFN-α处理,转染L60V和HBc野生株表达质粒的细胞内抗黏液病毒A(MxA)及 JAK-STAT 信号转导途径分子 STAT1、STAT2、IRF9表达减少,其中在转染 pEGFP-L60V 细胞内的 MxA、STAT1、STAT2和IRF9表达显著减少。结论HBc突变体L60V可能通过 JAK-STAT 信号转导途径抑制抗病毒蛋白MxA的表达来拮抗IFN-α的抗病毒作用；其拮抗IFN-α抗病毒作用比HBc更显著。
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