换一批
换一批HCMV重组嵌合抗原表达质粒构建及免疫反应的初步鉴定
Construction of HCMV recombination multi-epitope antigen expression vector and preliminary identification of immunogenicity
摘要目的：选用人巨细胞病毒( HCMV)抗原性强且亲水性较高片段构建融合抗原表达质粒，诱导其表达，纯化目的蛋白；并初步鉴定其免疫反应性。方法通过Protean软件分析了HCMV UL32、UL44、UL83序列，设计合理引物；各基因片段用Overlap方法连接，并引入BglⅡ、BamHⅠ酶切位点，使之可通过酶切与质粒pQE-80L连接。重组质粒转化入感受态BL21(DE3)菌株，经PCR、酶切鉴定目的基因后再诱导、表达、纯化，获得目的蛋白，采用Western blot法检测免疫反应性。结果诱导后的重组菌pQE80-L-UL32-UL44-UL83经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳( SDS-PAGE )证实蛋白表达在包涵体。纯化后获得大小约为52 ku的目的蛋白，采用Western blot法检测证实重组嵌合抗原能与HC-MV阳性血清有反应。结论构建了重组嵌合抗原表达质粒，并诱导、表达、纯化获得目的蛋白。 Western blot法鉴定嵌合抗原是HCMV特异性抗原且有免疫反应性。
更多相关知识
- 浏览164
- 被引0
- 下载9
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
