换一批
换一批筛选和鉴定抗卵巢癌活性六肽的靶点蛋白
Screening the receptor of anticancer hexapeptide in human ovarian carcinoma cells
摘要目的：采用 pull-down技术筛选乳源抗癌六肽( PG-PIPN)在人卵巢癌细胞株(SKOV3)上的靶点蛋白(受体)并进行鉴定。方法以 PGPIPN 的序列为参照，设计出 PG-PIPN基因，以BamH Ⅰ/Xho Ⅰ为酶切位点，将PGPIPN基因构建到表达质粒载体pGEX-4T-1中，转化到E. coli BL21中，用诱导剂异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷( IPTG)低温诱导表达的谷胱甘肽S转移酶( GST)标签融合蛋白作为诱饵蛋白；从SKOV3中提取的总蛋白作为捕获蛋白，运用 GST pull-down技术，筛选出靶点蛋白质，运用SDS-PAGE电泳进行初步鉴定，并用异硫氰酸荧光素( FITC)标记的PGPIPN孵育鉴定。结果 SDS-PAGE 电泳中有两条条带，一条为诱饵蛋白，一条为目的条带，在免疫荧光显微镜下观察到荧光PG-PIPN结合到该条带上。结论筛选和鉴定了PGPIPN作用于卵巢癌细胞上的靶蛋白，为研究其抗癌的作用机制及其信号转导通路奠定了基础。
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关键词
乳源抗癌六肽GST pull-down诱饵蛋白捕获蛋白靶点蛋白milk-derived anticancer hexapeptideGST pull-downbait proteincapture proteintarget proteins
栏目名称
基础医学研究
发布时间
2014-08-21
基金项目
国家自然科学基金
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