TLR7在呼吸道合胞病毒感染A549细胞诱导I型干扰素中的作用

The role of TLR7 in A549 cells with the respiratory syncytial virus infection induced type I interferon

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摘要目的：探讨 Toll 样受体7（TLR7）在呼吸道合胞病毒（RSV）感染 A549细胞诱导产生 I 型干扰素（IFN）抗病毒免疫反应中的作用。方法实验分正常对照组、RSV 感染组、TLR7 siRNA 沉默组，分别于感染的4、8、12、24 h 后收集各组细胞以及培养上清液。TLR7 siRNA 通过瞬时转染 A549细胞，半定量 RT-PCR 法检测 TLR7基因沉默效果；TRIzol 试剂提取细胞总 RNA，检测 TLR7、干扰素调节因子7（IRF7）、IFN-α、IFN-β的 mRNA 表达量变化；通过 Western blot 法检测 TLR7蛋白表达量；ELISA 法检测感染不同时间点 A549细胞培养上清液中 IFNα／β含量的变化。结果①转染24 h 后 TLR7 siRNA-2有效抑制 TLR7 mRNA 表达；② RSV 感染A549细胞后，TLR7、IRF7、IFN-α／β的 mRNA 以及 TLR7蛋白的表达量均升高，并与 RSV 感染之间存在时间依赖性关系；沉默 TLR7后，TLR7、IRF7、IFN-α／β的 mRNA 以及 TLR7蛋白的表达量较感染组均有明显下降；③ RSV 感染 A549细胞后，明显上调细胞培养上清液中 IFN-α／β的水平，TLR7 siRNA 沉默组 IFN-α／β的表达水平较 RSV 感染组均下降，差异有统计学意义，且 IFN-α的表达量下调更为显著。结论RSV 感染A549细胞后，TLR7被活化能够诱导产生I 型IFN，发挥抗病毒作用，且TLR7诱导产生的I 型IFN 以IFN-α为主。