换一批VZV糖蛋白E基因胞外域的原核表达及其兔抗血清的制备
Prokaryotic expression of varicella zoster virus glycoprotein E extracellular domain and preparation of antiserum
摘要目的 采用原核表达系统表达水痘-带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白E(gE)基因的胞外域,将纯化后的目的蛋白免疫新西兰家兔,制备该蛋白特异性抗血清.方法 构建原核表达质粒gE-pET-32a(+),测序后将其转化至E.coliBL21,以异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,获得VZVgE融合蛋白.采用SDS-PAGE电泳、Western blot法鉴定其特异性,利用Ni2+-NTA柱对gE蛋白进行纯化,复性后免疫新西兰家兔,获得兔抗VZV gE血清;采用间接免疫荧光、Western blot法和ELISA法检测该血清的特异性和效价.结果 成功诱导表达出VZV gE融合蛋白,SDS-PAGE鉴定提示其主要为包涵体表达,浓度约为3.01mg/ml.蛋白经Ni2+-NTA柱纯化后,纯度约为90％.Western blot法显示,经变性、复性后的该融合蛋白有良好的免疫反应性.用该蛋白免疫新西兰家兔后获得兔抗VZV gE血清.ELISA分析显示,该兔抗血清的效价为1∶6400.结论 成功构建了高效表达VZV gE蛋白的原核表达系统,获得较高纯度的gE蛋白,可以作为VZV亚单位疫苗的候选抗原,制备了特异性及效价均较高的兔抗VZV gE多克隆抗体,为VZV感染的临床诊断及治疗提供了重要的实验工具.
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关键词
水痘-带状疱疹病毒原核表达融合蛋白兔抗血清varicella-zoster virusprokaryotic expressionfusion proteinpolyclonal antibody
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2016-05-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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