换一批
换一批PDX1真核表达载体的构建及其对PANC-1细胞PI3K/AKT信号途径的影响
Construction of eukaryotic expression vector of PDX1 gene and the effect of PDX1 on PI3K/AKT pathway in PANC-1
摘要目的 构建胰腺十二指肠同源框蛋白1(PDX1)基因真核表达载体并转染至PANC-1细胞,观察其对PI3K/AKT信号通路的影响.方法 从Hela细胞中提取总RNA,逆转后PCR扩增PDX1编码区片段,然后将PDX1的CDS插入PCMV6-Entry质粒构建PCMV6-Entry-PDX1表达重组体.重组体转染至PANC-1细胞中通过G418筛选出稳定表达细胞株.Western blot分析PDX1蛋白水平表达及p-AKT水平变化.结果 PDX1基因成功在PANC-1中表达.利用West-ern blot检测验证获得了稳定的PDX1过表达细胞株.West-ern blot结果显示:过表达PDX1的细胞株AKT表达含量与正常细胞及对照细胞没有区别而p-AKT水平降低.结论 PDX1基因过表达能够降低PANC-1细胞的p-AKT水平.
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分类号
R735.9
栏目名称
DOI
10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2017.02.007
发布时间
2017-04-10
基金项目
项目基金:国家自然科学基金（81271748）
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