换一批
换一批D896N突变型EGFR稳转细胞株的构建及其对吉非替尼敏感性的研究
The study of constructing the cell carrying EGFR D896N mutation and its sensitivity to gefitinib
摘要目的 构建携带D896N突变型EGFR基因的重组质粒,转染Ba/F3细胞后对其的表达及对吉非替尼的敏感性进行研究.方法 PCR构建重组质粒MSCV-Tel-EGFR D896N,与2种辅助质粒MLV和VSVG共转染293T细胞包装产生慢病毒,对Ba/F3细胞进行转染.Puromycin筛选后,Western blot检测EGFR及p-EGFR的表达;撤除IL-3培养观察细胞是否正常增殖;Western blot检测并比较Ba/F3-Tel-EGFR L858R、Ba/F3-Tel-EGFR D896N对于吉非替尼的敏感性.结果 酶切及测序验证重组质粒构建无误,Western blot检测转染后的Ba/F3细胞中EGFR及p-EGFR有表达,撤除IL-3后细胞无法正常增殖,吉非替尼作用后p-EGFR明显下降.结论 成功构建了表达D896N突变型EGFR的Ba/F3细胞株,初步判断该位点并非驱动基因,但是对吉非替尼有一定敏感性.
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分类号
R734.2
栏目名称
基础医学研究
DOI
10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2018.09.002
发布时间
2018-11-28
基金项目
安徽省卫生计生委中医药科研课题
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