雷公藤甲素通过抑制细胞色素P450 3A4酶增强肝损伤研究

Triptolide enhances liver injury by inhibiting its metabolic enzyme cytochrome P450 3A4

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摘要目的研究雷公藤甲素诱导细胞色素P450 3A4(CYP3A4)表达下调在其引发肝损伤中的作用.方法将L-02细胞和C57BL/6雄性小鼠随机分为4组,分别为正常组(C)、雷公藤甲素(TP)组、雷公藤甲素(TP)+卡马西平(CBZ)组、雷公藤甲素(TP)+氨氯地平(AML)组,24 h后收集培养基,C57BL/6雄性小鼠2周后安乐死,取血和肝脏.流式细胞仪观察用药后各组细胞的凋亡率,小鼠肝脏进行组织染色观察肝细胞损伤情况.试剂盒检测细胞上清液和小鼠血清的丙氨酸氨基转移酸(alanine transaminase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate transaminase,AST).通过Western blot法和RT-PCR法检测细胞和小鼠肝脏CYP3A4的mRNA和蛋白表达水平,应用高效液相色谱法检测细胞培养基中和小鼠血清中雷公藤甲素的含量.结果流式细胞仪检测的细胞凋亡结果和小鼠肝脏病例照片结果显示,TP组明显比C组严重,加入P450 3A4诱导剂的TP+ CBZ组则明显减轻,而加入P450 3A4抑制剂的TP+ AML组的细胞进一步加剧.体内外ALT和AST检测结果显示,TP组明显高于C组,TP+ CBZ组则明显降低,TP+ AML组进一步增加.Western blot法和RT-PCR结果显示,TP组CYP3A4表达量明显低于C组,TP+ CBZ组的CYP3A4表达量则明显升高,TP+ AML组的CYP3 A4表达量更低.高效液相检测结果显示,TP+ CBZ组中TP的含量低于TP组,而TP+AML组中TP的含量则相反.结论 TP通过抑制其主要代谢酶CYP3A4来减慢自身代谢,可能是其产生肝损伤的机制之一.