换一批
换一批小鼠骨髓间充质干细胞的稳定高效培养及外泌体的提取
Stable and efficient culture of mouse bone marrow mesenchymal stem cells and extraction of its exosomes
摘要目的 建立稳定、高效的骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)培养及外泌体提取方法.方法 通过全骨髓、差速贴壁并辅助以低氧(5％O2)环境的方法进行小鼠BM-MSCs培养,收集细胞,鉴定干细胞表面标志物,进行成骨、成脂及成软骨诱导;并收集上清液,超速分离的方法提取外泌体后鉴定.结果 小鼠BM-MSCs生长状态好,第3代细胞就可达到95％以上的纯度且可稳定传代至15代左右,表达间充质干细胞(MSCs)标志物,且可被成功诱导分化成骨、成脂肪及软骨组织.超速离心得到的细胞外囊泡具有典型外泌体样结构,Western blot鉴定显示具有外泌体特征性蛋白标志物.结论 全骨髓培养方法使得小鼠BM-MSCs的损失最少,低氧(5％O2)环境下的差速贴壁法使得小鼠BM-MSCs增殖速度快,纯度高.该方法培养的小鼠BM-MSCs可稳定分泌外泌体囊泡,为小鼠MSCs的培养及其外泌体获取提供了良好的方法.
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