铁皮石斛多糖对RANKL诱导的小鼠骨髓单核细胞向破骨细胞分化影响的体外研究

Effect of Dendrobium candidum polysaccharide on RANKL-induced differentiation of mouse bone marrow macrophages into osteoclasts

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摘要目的体外探讨铁皮石斛多糖对核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导骨髓巨噬细胞(BMMs)向破骨细胞分化的影响.方法使用水提醇沉法从铁皮石斛研磨物提取石斛多糖;通过巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导培养C57BL/6小鼠BMMs;用CCK-8法检测不同浓度石斛多糖对小鼠BMMs的增殖和细胞活力的影响;通过Western blot检测p65蛋白(p65)、磷酸化p65蛋白(p-p65)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38)、磷酸化p38(p-p38)、活化T细胞核因子1(NFATc1)、转录因子c-Fos(c-Fos)的表达;通过qRT-PCR检测抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)、活化T细胞核因子1(NFATc1)、组织蛋白K(CTSK)、金属基质蛋白酶9(MMP9)基因的表达;通过RANKL与不同浓度石斛多糖作用BMMS,进行TRACP染色.结果铁皮石斛多糖浓度达到400μg/ml时,其对BMMs的增殖产生明显抑制作用(P<0.05);Western blot结果显示:铁皮石斛多糖降低了NFATc1、c-Fos蛋白的表达,降低了p65和p38的磷酸化水平,而且表现出了一定的剂量依赖性(P<0.05);qRT-PCR结果显示:相较于RANKL诱导组,石斛多糖组下调NFATc1、MMP9、CTSK、TRACP基因的表达(P<0.05);TRACP染色显示,RANKL诱导组可见体积相对较大,细胞核数目>10的破骨细胞形成,浓度为200μg/ml石斛多糖组破骨细胞形成受到抑制,仅形成少数体积相对较小的不成熟破骨细胞.结论体外铁皮石斛多糖抑制破骨细胞相关基因的表达和相关通路蛋白的合成,抑制RANKL诱导的BMMs的破骨细胞分化.