高尿酸背景下P2X7R的Arg 307>Gln位点基因型的功能研究

Functional research of Arg 307>Gln locus genotype of P2 X7 R under high uric acid background

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摘要目的通过建立稳定表达嘌呤受体P2 X配体门控离子通道7(P2X7R)的野生型或突变体型人急性白血病单核细胞株(THP-1)源性单核细胞系,分析高尿酸背景下P2X7R的Arg 307>Gln SNP基因型的功能改变.方法慢病毒转染THP-1细胞,建立稳定表达野生型、突变体型Arg 307>Gln和空病毒型的THP-1细胞系,设置野生型、突变体型Arg 307>Gln和空病毒型3型,每型分3组,分别加入尿酸单钠盐(MSU)(M组)、MSU+三磷酸腺苷(ATP)(MA组)、空白对照组(C组).丙二醇甲醚醋酸酯(PMA)分别刺激3组细胞,离心撤去PMA;M组、MA组中加入MSU孵育,之后MA组中加入ATP孵育;分别收集3组细胞上清液和细胞.ELISA法检测3组上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)蛋白表达水平,qRT-PCR检测3组细胞IL-1β、核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白含半胱氨酸天冬氨酸-1蛋白酶结构域(ASC)和Caspase-1 mRNA表达水平.结果单纯加入MSU晶体后,野生型、突变体型Arg 307>Gln和空病毒型3者之间均无差异(P>0.05).加入ATP孵育后,野生型中IL-1β和NLRP3水平均高于突变体型Arg 307>Gln,差异有统计学意义(P<0.05).而ATP-P2X7R-IL-1β信号通路上ASC和Caspase-1 mRNA水平在野生型和突变体型2者之间无差异(P>0.05).结论在高尿酸背景下,突变体型Arg 307>Gln使P2X7R功能明显下调,IL-1β和NLRP3表达水平均降低.Caspase-1、ASC可能分别在激活通路过程中被降解.