Btk抑制剂依鲁替尼对高糖刺激巨噬细胞炎症的抑制作用及机制

Effect of Bruton's tyrosine kinase inhibitor, ibrutinib,on inflammatory response in high glucose-induced macrophages

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摘要目的探讨Bruton酪氨酸激酶(Btk)抑制剂依鲁替尼(PCI-32765)对高糖诱导巨噬细胞炎症的抑制作用及机制.方法以骨髓来源巨噬细胞(BMMs)为研究对象,优化实验条件后,分为低糖组(LG)、抑制剂对照组(LG+ PCI-32765)、高糖组(HG)和抑制剂组(HG+ PCI-32765).采用流式细胞术鉴定巨噬细胞,酶联免疫吸附法(ELISA)和实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测细胞及细胞上清中炎症因子——单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)的含量及mRNA相对表达量;蛋白印记法(Western blot)检测iNOS、Btk、ERK、JNK、p38MAPK、NF-κB p65、IκB及其磷酸化蛋白水平;激光共聚焦法检测巨噬细胞的活化及p65核转移.结果与低糖组比较,高糖组炎症因子的表达升高(P＜0.05),抑制剂组较高糖组有下降(P＜0.05);高糖组p-Btk相对表达量较低糖组升高(P＜0.01), p-ERK、p-JNK、p-p38MAPK、NF-κB p-p65和p-IκB的相对表达量亦升高(P＜0.05),而PCI-32765可降低其中p-Btk、p-ERK、NF-κB p-p65和p-IκB的表达(P＜0.05);巨噬细胞在高糖刺激下发生激活,iNOS表达升高(P＜0.01),PCI-32765可减低其表达(P＜0.05);高糖刺激下p65发生核转移,PCI-32765使其减少.结论 PCI-32765可以抑制高糖引起巨噬细胞激活,通过下调ERK和NF-κB信号通路抑制炎症因子的释放.