换一批
换一批线粒体DNA对Caco-2细胞通透性的影响及机制
Effects of mitochondrial DNA on permeability of Caco-2 cells and its mechanism
摘要目的 探讨线粒体脱氧核糖核酸(mtDNA)对Caco-2细胞单层通透性的影响及作用机制.方法 利用Transwell培养板制备Caco-2细胞模型,从C57BL/6J小鼠肝脏中提取mtDNA,然后在Transwell培养板顶侧加入不同浓度的mtD-NA(0、1、5、10 μg/ml)和异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FITC-dextran),检测不同时间跨上皮电阻(TEER)和底室中FITC-dextran含量的改变,确定最佳mtDNA浓度;再将实验分为4组,分别加入FITC-dextran、mtDNA+FITC-dextran、ODN TTAGGG+ FITC-dextran和mtDNA+ODN TFAGGG+ FITC-dextran,检测不同时间TEER和底室中FITC-dextran含量的改变.同时分别用mtDNA、ODN TTAGGG、mtDNA+ODN TTAGGG预处理Caco-2细胞,采用qRT-PCR方法检测Toll样受体9 (TLR9) mRNA表达水平,ELISA检测上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β3和IL-18的水平.结果 与对照组相比,随着mtDNA作用时间的延长和作用浓度的增加,Caco-2细胞单层的TEER降低,底室中FITC-dextran含量增加,其中mtDNA浓度为10 μg/ml时,TEER降低明显;以10μg/ml的mtDNA为对照,加入ODN TTAGGG可减少TEER下降程度,底室中FITC-dextran含量降低,同时TLR9 mRNA表达水平和炎症因子水平降低.结论 mtDNA增加Caco-2细胞单层的通透性,机制可能与激活TLR9信号通路有关.
更多相关知识
- 浏览250
- 被引1
- 下载15
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
