抑制PCSK9对人主动脉内皮细胞钙化的保护作用
The protective effect of inhibiting PCSK9 on calcification of human aortic endothelial cells
摘要目的 探讨抑制前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)对地塞米松联合L-抗坏血酸和β甘油磷酸诱导的入主动脉内皮细胞(HAEC)钙化的影响.方法 使用不同浓度(0、10、30、50 mmol/L)β甘油磷酸+50 μg/ml L-抗坏血酸+ 100 nmol/L地塞米松刺激HAEC,筛选出诱导细胞钙化的最佳浓度,并验证HAEC钙化时,PCSK9的mRNA和蛋白表达.采用小干扰RNA(siRNA)敲低HAEC中PCSK9的表达,采用相同条件诱导细胞钙化,检测敲低PCSK9后HAEC中PCSK9及主要钙化指标的表达变化.茜素红S染色观察细胞内的钙化沉积.结果 ①当β甘油磷酸浓度为30 mmol/L时,HAEC中主要钙化指标骨形态发生蛋白(BMP)2、BMP4和Runt相关转录因子2(RUNX2)的mRNA和蛋白表达水平达到峰值,诱导钙化效果最佳;②诱导HAEC钙化后细胞内PCSK9的mRNA和蛋白表达水平明显升高;③敲低细胞内PCSK9的表达能够抑制体外诱导的HAEC钙化,钙化相关基因和蛋白的表达降低,细胞内钙盐沉积明显减少.结论 PCSK9的表达与HAEC钙化水平相关,敲低PCSK9可抑制地塞米松联合抗坏血酸和β甘油磷酸诱导的HAEC钙化.
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