基于RhoA/ROCK通路研究硫化氢对星形胶质细胞低氧损伤的影响

The effect of hydrogen sulfide on hypoxic injury of astrocytes based on RhoA/ROCK pathway

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摘要目的探讨硫化氢(H2S)对星形胶质细胞反应性增生和凋亡的影响及其RhoA/ROCK信号通路抑制机制.方法构建星形胶质细胞低氧培养(94％ N2-5％ CO2-1％2)模型,分别给予硫氢化钠(NaHS)(50、100、200.μmol/L)和ROCK抑制剂Fasudil(5μmol/L)预处理.低氧培养48 h后,用CCK-8法检测细胞活力,用分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)活性,流式细胞仪检测细胞凋亡,用钙离子荧光指示剂fluo-8检测细胞内Ca2+浓度的变化,使用Western blot法检测细胞中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、Ras同源家族成员A (RhoA)、Rho蛋白激酶1(ROCK1)和Rho蛋白激酶2(ROCK2)蛋白的表达.结果 NaHS(100、200 μmol/L)明显提高低氧培养星形胶质细胞的活力、降低培养上清液中LDH活性、减少细胞凋亡和细胞内Ca2+超载,提示NaHS对星形胶质细胞低氧培养损伤的保护作用;ROCK抑制剂Fa-sudil也具有类似的保护作用,并且联合应用Fasudil和NaHS对星形胶质细胞的保护作用进一步增强;NaHS(100、200μmol/L)以及Fasudil均可抑制低氧损伤所致星形胶质细胞中GFAP、RhoA、ROCK1和ROCK2蛋白表达增高,联合应用Fasudil和NaHS对GFAP、RhoA、ROCK1和ROCK2蛋白表达的抑制作用更为明显.结论 H2S对于星形胶质细胞的低氧损伤有明显地保护作用,其作用可能与抑制RhoA/ROCK通路的激活有关.