网络药理学分析及实验验证银丹心脑通保护MIRI的作用机制

Network pharmacological analysis and experimentalverification of the mechanism of Yindan Xinnaotong in protecting myocardial ischemia-reperfusion injury

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摘要目的基于网络药理学探讨银丹心脑通软胶囊(YD)治疗心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的物质基础、作用机制和实验验证,为该药治疗MIRI提供理论参考.方法利用TCMSP、Swiss Target Prediction、中国知网等数据库检索YD的主要活性成分和作用靶点,GeneCards数据库筛选MIRI疾病靶点,Cytoscape软件构建"药物-成分-疾病-靶点"网络关系,富集分析预测作用机制,并将排名前三的主要活性成分与PPI网络中排名前六的靶点进行进行分子对接验证.人心肌AC-16细胞进行低氧/复氧(H/R)模型构建,初步验证核心靶点.通过CCK-8比色法检测细胞活力,探索最适药物浓度.光镜下观察银丹心脑通对心肌细胞形态学变化影响.LDH渗漏检测细胞膜完整性;Western blot检测STAT3、p-STAT3、PI3K、AKT1和p-AKT1的表达.结果共得到YD活性成分105个,药物靶点382个,MIRI疾病靶点1223个,药物-疾病共同靶点160个,关键靶点涉及AKT1、STAT3、VEGFA、TNF、MAPK8、PIK3CA等,GO析主要涉及细胞凋亡、脂溶反应、肌肉细胞增殖、细胞因子介导的炎症反应、氧化应激等.分子对接结果显示,VEGFA、APP、PIK3CA与槲皮素、木犀草素、山柰酚都能较好的结合.细胞实验显示,200 mg/L的YD能显著地促进AC-16细胞增殖,减少LDH渗漏.Western blot结果显示,银丹心脑通能激活STAT3和PI3K-AKT1信号通路,保护心肌.结论 YD能通过多成分、多靶点、多通路保护MIRI.