慢病毒介导的SPARC基因沉默对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖调亡的影响

Effect of lentivirus-mediated SPARC gene silencing on proliferation and apoptosis of human keloid fibroblasts

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摘要目的观察慢病毒介导的SPARC基因沉默对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响并初步探讨其影响机制.方法将携带SPARC shRNA的慢病毒载体(LV2N-shRNA-SPARC,sh-SPARC组)及空载体(LV2-NC,sh-NC组)转染人瘢痕疙瘩成纤维细胞(HKF),以未作任何处理的成纤维细胞为空白对照组,应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot分别检测SPARC mRNA和蛋白的表达.四甲基偶氮噻唑蓝比色法(MTT)检测各组细胞的增殖情况;流式细胞仪法测定HKF细胞周期及细胞凋亡;Western blot检测各组细胞中TGF-β1及TβRⅠ的表达.结果 ①SPARC-shRNA慢病毒载体感染HKF后,sh-SPARC组细胞中SPARC mRNA和蛋白表达量明显低于sh-NC组和空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05);②MTT结果显示,与对照组相比,sh-SPARC组细胞增殖减慢(P<0.05);③ 流式细胞术结果显示,sh-SPARC组成纤维细胞进入S期的比例低于sh-NC组和空白对照组(P<0.05);细胞凋亡率较对照组增加(P<0.05);④Western blot结果显示,sh-SPARC组TGF-β1及TβRⅠ的蛋白表达水平明显降低.结论 SPARC基因沉默能抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖,阻滞细胞周期进程,促进凋亡,其机制可能与TGF-β信号通路的下调有关.