冷冻消融治疗对肺腺癌细胞凋亡的影响

Effect of cryotherapy on apoptosis of lung adenocarcinoma cells

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摘要目的探究冷冻消融治疗对肺腺癌细胞凋亡的影响.方法根据冷冻消融术后肿瘤组织局部变化,在细胞水平上建立肺癌冷冻消融模型.传代培养人肺癌H1299细胞株,将细胞分为4组:A组,未处理细胞,为对照组;B组,未处理细胞培养液中加入坏死液(将细胞悬液放入液氮罐中冷冻5 min,37℃复温后离心取上清液,得到坏死液);C组,亚致死细胞(细胞在-80℃环境中冷冻7 min,模拟亚致死状态);D组,亚致死细胞培养液中加入坏死液.24 h后用流式细胞术检查冷冻消融对肺癌细胞凋亡的影响,qRT-PCR和Western blot检测冷冻消融对凋亡相关分子B细胞淋巴瘤基因-2(Bcl-2)及Bcl-2相关x蛋白(Bax)表达的影响.采用Lewis肺腺癌细胞株建立C57BL/6小鼠皮下移植瘤模型,造模成功的小鼠随机分成2组,假手术组和冷冻消融组,每组4只,氩氦刀冷冻14 d后,取肿瘤组织,通过qRT-PCR和Western blot检测冷冻消融对凋亡相关分子Bax及Bcl-2表达的影响.结果细胞冷冻模型中与对照组A组相比,B、C、D组均能促进细胞凋亡(P<0.05),且D组细胞凋亡率最高,高于其他组(P<0.05),体外和体内实验均显示冷冻消融能提高Bax mRNA和蛋白的表达(P<0.05),体内实验中Bcl-2 mRNA和蛋白的表达均下降(P<0.05),在体外细胞冷冻模型中差异无统计学意义.结论冷冻消融通过细胞凋亡机制达到有效消融目的,其作用机制可能与降低Bcl-2/Bax相关.