AKT3逆转miR-22-3p/29a-3p对LX-2细胞活化的协同抑制作用

AKT3 reverses the synergistic inhibition of miR-22-3p/29a-3p on LX-2 cell activation

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摘要目的探讨丝氨酸/苏氨酸激酶 3(AKT3)能否逆转miR-22-3p/29a-3p对人肝星状细胞LX-2 活化的协同抑制作用.方法利用TargetScan、Starbase、miRDB和DIANA预测miR-22-3p和miR-29a-3p的共同靶基因,对筛选出的靶基因进行KEGG、GO 和蛋白-蛋白互作(PPI)分析;RNAhybrid分析候选靶基因与两个miRNAs结合的自由能,并通过双萤光素酶报告实验确定它们的靶向关系;采用 CCK-8、Tran-swell和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测LX-2 细胞增殖、迁移以及纤维化标志物的表达.结果 miR-22-3p 和miR-29a-3p的共同靶基因有 24 个,且它们富集在与肝纤维化相关的信号通路和生物学过程;候选靶基因AKT3 与miR-22-3p和miR-29a-3p的结合自由能分析结合双萤光素酶实验结果提示AKT3 是miR-22-3p和miR-29a-3p的共同靶基因;miR-22-3p和 miR-29a-3p mimics 能够单独或协同抑制LX-2 细胞的增殖、迁移以及纤维化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和I型胶原α1 链(COL1A1)mRNA的表达(P<0.05),AKT3 过表达后能够逆转 miR-22-3p 和 miR-29a-3p mimics对LX-2 细胞的上述协同抑制作用(P<0.05).结论AKT3 过表达可逆转miR-22-3p和miR-29a-3p对LX-2 细胞活化的协同抑制作用.