换一批
换一批酿酒酵母中脱氧羟腐胺赖氨酸合酶的结构研究
The study on the structure of deoxyhypusine synthase in Saccharomyces cerevisiae
摘要目的 通过研究酿酒酵母中脱氧羟腐胺赖氨酸合酶DHS(Dys1)的结构,揭示羟腐胺赖氨酸化修饰的分子机制,为人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)等高增殖性疾病的治疗提供理论基础和依据.方法 利用大肠埃希菌BL21表达系统,体外构建表达载体并表达Dys1.通过亲和层析、分子筛等方法分离纯化Dys1的蛋白质样品.在6％聚乙二醇(PEG)8000、0.1 mo1/L 羟乙基嘁嗪乙磺酸(Hepes)pH 6.5、8％乙二醇的条件下得到Dys1的锥形晶体.用X射线衍射晶体,用CCP4i、Coot软件解析2.8 ?分辨率下的Dys1三维晶体结构.结果Dys1的整体结构为四聚体,活性口袋和辅因子NAD+结合位点位于每个单体之间,单体的核心部位形成一个罗斯曼折叠,构成活性位点的氨基酸残基具有高度保守性.结论 首次解析了 Dys1的三维结构,发现了辅因子NAD+与酶的结合模式,证实了该酶四聚体的形式和N端的模体是其行使催化功能所必需的.
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关键词
酿酒酵母脱氧羟腐胺赖氨酸合酶蛋白质表达纯化晶体结构X-射线晶体衍射Saccharomyces cerevisiaedeoxyhypusine synthaseprotein expression and purificationcrystal struc-tureX-ray diffraction
分类号
Q518.3
栏目名称
基础医学研究
DOI
10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2023.12.002
发布时间
2024-02-29
基金项目
安徽省高校自然科学研究项目
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