miR-23b-3p调控肾间质成纤维细胞成骨样分化参与Randall斑形成的机制研究

Study on the mechanism of miR-23b-3p regulating osteogenic differentiation of renal interstitial fibroblasts and participating in Randall's plaque formation

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摘要目的探究miR-23b-3p对肾间质成纤维(hRIFs)细胞成骨样分化和Randall斑形成的影响及其可能机制.方法采用qRT-PCR技术检测草酸钙(CaOx)结石患者Randall斑组织(RP)和接受肾切除术的肾肿瘤患者正常乳头状组织(nRP)的miR-23b-3p和肌细胞特异性增强子因子2C(MEF2C)、成骨标志物人骨钙蛋白(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)的mRNA表达水平;体外分离、培养hRIFs细胞,将miR-23b-3p过表达质粒pSi-miR-23b-3p及空载质粒pSi-NC和MEF2C慢病毒过表达质粒Lv-MEF2C及空载质粒Lv-NC转染至hRIFs细胞中,并诱导细胞成骨分化14 d;ELISA法检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性;茜素红染色观察各组细胞矿化结节形成情况;qRT-PCR 检测细胞中 miR-23b-3p 和 MEF2C、OCN、OPN、Runx2 mRNA表达水平;Western blot检测细胞中MEF2C蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-23b-3p与MEF2C的靶向关系.结果 ①与nRP组比较,RP组中miR-23b-3p低表达,而MEF2C、OCN、OPN和Runx2 mRNA高表达;②hRIFs成骨诱导14 d后,细胞中ALP活性升高,矿化结节形成能力增强,miR-23b-3p表达水平降低,而MEF2C、OCN、OPN和Runx2 mRNA表达水平及MEF2C蛋白表达水平升高;③miR-23b-3p过表达降低成骨诱导后hRIFs细胞中ALP活性,抑制细胞矿化结节形成能力,下调细胞中OCN、OPN、Runx2 mRNA表达水平;④MEF2C过表达可逆转miR-23b-3p过表达对hRIFs细胞成骨分化的抑制作用;⑤MEF2C是miR-23b-3p下游靶基因.结论 miR-23b-3p在RP组织及hRIFs细胞成骨样分化过程中低表达,上调miR-23b-3p可抑制hRIFs细胞的成骨样分化,其作用机制可能与靶向沉默MEF2C有关.