摘要目的 构建p62 基因过表达慢病毒载体及其表达系统,并在人单核细胞白血病细胞(THP-1)中稳定表达,为在细胞水平研究p62 基因的作用提供途径与方法.方法 采用聚合酶链式反应(PCR)扩增p62 基因片段,将扩增产物连接至线性化pcDNA3.1-Flag-PCDH10 真核表达慢病毒载体;PCR鉴定重组质粒,将构建成功的重组质粒和包装质粒共转染至人胚胎肾细胞 293(HEK 293T);用重组慢病毒感染人单核细胞白血病(THP-1)细胞,氨苄霉素筛选阳性细胞克隆株;Western blot和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测高表达p62 基因的THP-1 细胞株(过表达组)和转染不含p62 基因空质粒(对照组)的THP-1 细胞株;感染肺炎克雷伯菌(Klebsiella Pneumoniae,K.p.)后,RT-qPCR检测THP-1 细胞中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β 和 趋化因子1(Cxcl1)表达水平.结果 通过PCR成功获得p62基因片段并连接到pcDNA3.1-Flag-PCDH10 病毒载体上,并且PCR 检测显示 p62-pcDNA3.1-Flag-PCDH10 重组质粒构建成功;挑选慢病毒感染THP-1 细胞后抗氨苄青霉素细胞株,Western blot检测结果显示药筛存活的THP-1 细胞较对照组细胞P62 蛋白表达增多(P<0.001),且RT-qPCR检测显示p62 mRNA表达增高(P<0.001),说明成功构建高表达P62 蛋白的THP-1 细胞株;感染K.p.后,高表达P62 的THP-1 细胞中TNF-α、IL-1β和Cxcl1 表达水平增高(P<0.01).结论 经三质粒包装系统可以成功构建 p62-pcDNA3.1-Flag-PCDH10 慢病毒载体及高表达P62 蛋白THP-1 细胞株,为后续p62 基因的研究提供了基础.