换一批
换一批摘要目的 繁育T细胞条件性敲除Spi1 基因的小鼠并对其进行鉴定,为进一步探索Spi1 编码蛋白PU.1 的作用提供研究基础.方法 将Lck-Cre小鼠与 Spi1flox/flox小鼠进行杂交繁育,通过聚合酶链式反应(PCR)和琼脂糖凝胶电泳鉴定小鼠基因型,筛选出基因型为Lck-Cre×Spi1flox/flox的小鼠即为T细胞条件性敲除Spi1 基因的纯合子小鼠.使用磁珠分选脾脏T淋巴细胞,并应用Western blot、实时荧光定量PCR(qPCR)及流式细胞术检测PU.1 在T细胞中的敲除效率.结果 Lck-Cre×Spi1flox/flox小鼠基因稳定遗传.与Spi1flox/flox小鼠相比,Lck-Cre×Spi1flox/flox小鼠脾脏T细胞中的PU.1 表达水平显著降低.结论 该研究应用 Cre/LoxP 系统和CRISPR/Cas9 技术成功构建了T细胞条件性敲除Spi1 基因小鼠,为后续研究PU.1 在T细胞相关疾病中的具体作用提供了可靠的动物模型.
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关键词
Spi1Cre/LoxP系统CRISPR/Cas9技术T细胞PU.1条件性敲除Spi1Cre/LoxP systemCRISPR/Cas9 technologyT cellsPU.1conditional knockout
分类号
R-332
栏目名称
基础医学研究
DOI
10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2024.04.006
发布时间
2024-06-20
基金项目
安徽省高校杰出青年科研项目
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