摘要目的 探讨建立阿米卡星(AKN)体外肾损伤模型的方法,研究在AKN体外肾损伤模型中王不留行黄酮苷(VA)的保护作用及机制.方法 体外培养人肾小管上皮细胞(HK-2),孵育不同浓度的 AKN或 VA,MTT法检测细胞活力,确定药物浓度;采用二氢乙锭(DHE)探针和谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)检测试剂盒检测细胞内氧化应激状态的变化;提取总RNA,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测肾损伤分子-1(KIM-1)和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)基因表达的变化;提取总蛋白,Western blot检测铁死亡相关的蛋白溶质载体蛋白家族47 成员11(SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶 4(GPX4)的水平.结果 高浓度AKN在体外可以显著引起 HK-2 细胞活力的下降,AKN对HK-2 细胞的半数抑制浓度(IC50)为(5.74±0.47)mmol/L.25～100 μmol/L的VA可以提高AKN刺激后的HK-2 细胞活力(P<0.05).AKN(4 mmol/L)处理后,KIM-1 和NGAL的mRNA表达水平显著高于阴性对照(NC)组(P<0.001);VA(50 μmol/L)可以显著降低KIM-1(P<0.01)和NGAL(P<0.05)的mRNA表达水平.AKN处理 3h后DHE染色强度升高但差异无统计学意义,6～24 h后DHE染色强度显著大于0h组(P<0.01).此外,AKN处理6～24h后MDA水平显著上升,GSH水平显著下降,差异均有统计学意义(P<0.05).AKN刺激6～24h后,铁死亡相关蛋白SLC7A11 和GPX4 表达均明显下降(P<0.001).VA同时孵育 24 h,显著逆转DHE染色、GSH和MDA水平的变化及SLC7A11 和GPX4 蛋白的下降(P<0.001).结论 该研究通过高浓度AKN体外刺激HK-2 细胞建立AKN体外肾损伤模型,并发现VA可能通过抑制过氧化应激相关的铁死亡途径减轻AKN导致的肾小管细胞损伤.