换一批
换一批小鼠CTSK敲降重组腺相关病毒的构建及其功能研究
Construction of mouse CTSK knockdown recombinant adeno-associated virus and its functional study
摘要目的 构建小鼠组织蛋白酶K(CTSK)基因的敲降重组腺相关病毒(AAV-shCTSK),检测AAV-shCTSK在小鼠体内的敲降效率,及其对脂肪组织脂质储存的影响.方法 设计阴性对照组(NC)及CTSK的shRNA引物,退火后插入到骨架载体中,挑选克隆并测序鉴定,重组质粒经纯化后,利用转染试剂PEI将构建好的腺相关病毒载体、包装质粒和辅助质粒共转染到293T细胞中,进行腺相关病毒包装与扩增,得到AAV-shNC以及AAV-shCTSK.利用脂肪组织原位注射将AAV病毒注射入小鼠附睾脂肪组织,2周后免疫印迹实验检测小鼠脂肪组织中 CTSK蛋白的表达量及HE染色检测脂肪组织中脂滴大小.结果 成功获得AAV-shNC以及AAV-shCTSK腺相关病毒.原位注射AAV-shCTSK的小鼠脂肪组织中CTSK成功敲降,脂肪组织中白色脂肪细胞显著变小.结论 小鼠CTSK的敲降腺相关病毒构建成功,脂肪组织CTSK敲降引起脂肪组织中脂质含量减少.
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分类号
Q782
栏目名称
基础医学研究
DOI
10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2024.06.014.
发布时间
2024-08-01
基金项目
国家自然科学基金
安徽省自然科学基金青年项目
安徽医科大学校科研基金青年项目
安徽高校自然科学研究项目
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