换一批表达趋化因子配体13的重组A组16型柯萨奇病毒的构建
Construction of Recombinant Coxsackievirus A16 Co-expressing Chemokine Ligand 13
摘要柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CV-A16)是小核糖核酸病毒科肠道病毒属病毒,是手足口病(Hand,foot and mouse disease,HFMD)的主要病原体之一.CV-A16在世界范围内广泛流行,但目前还没有有效预防CV-A16感染的疫苗上市,CV-A16疫苗的研发仍处于实验室研究阶段.本研究从改善CV-A16诱导体液免疫能力的角度出发,利用反向遗传学手段构建共表达趋化因子配体13的重组A组16型柯萨奇病毒(Coxsackievirus A16-Chemokine(C-X-C motif)ligand 13,CV-A16-CXCL13).首先利用全基因合成方法设计合成MluⅠ-T7-5'UTR-CXCL13-VP4-VP2-Nde Ⅰ片段,将该片段插入pCR-XL-TOPO-CV-A16载体中,获得pCR-XL-TOPO-CV-A16-CXCL13克隆载体.将该载体线性化,体外转录出重组病毒RNA并转染细胞,最终获得包装成功的CV-A16-CX-CL13重组病毒.使用PCR检测到病毒感染细胞后趋化因子配体13(Chemokine (C-X-C motif) ligand 13,CX-CL13)及结构蛋白VP1在基因水平的表达;免疫印记及免疫荧光结果检测到CXCL13与VP1蛋白水平的表达;电镜结果显示重组病毒为直径20～30nm球状颗粒;增殖曲线显示重组病毒能够在细胞中正常复制.本研究成功构建了CV-A16-CXCL13病毒,为CV-A16感染特征的研究和疫苗研发提供参考.
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DOI
10.13242/j.cnki.bingduxuebao.003533
发布时间
2019-07-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
:中央级公益性科研院所基本科研业务费,中国医学科学院病毒疫苗研发系统研究重点实验室
中国医学科学院医学与健康科技创新工程重大协同创新项目（(2016-I2M-1-014)）
重要新发突发传染病生物安全基础与防控技术研究（题目）
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