换一批重组核心蛋白聚糖转染对HepG2细胞p21WAF1/CIP1表达的影响
Influences of recombinant decorin gene transfection on p21WAF1/CIP1 of HepG2 hepatoma cells
摘要目的:将已构建完成的分泌型核心蛋白聚糖真核表达载体转染到HepG2细胞中并检测核心蛋白聚糖及p21WAF/CIP1的表达,探讨核心蛋白聚糖抗肿瘤作用的机制.方法:HepG2细胞分为转染pcDNA3.1-DCN载体的转染组和转染pcDNA3.1空载体的对照组,脂质体介导核心蛋白聚糖真核表达载体及质粒pcDNA3.1载体分别转染到HepG2细胞中,经G418筛选建立稳定转染的细胞株,采用RT-PCR法检测核心蛋白聚糖和p21WAF/CIP1 mRNA表达;Western blotting法检测核心蛋白聚糖和p21WAF/CIP1蛋白质的表达;免疫组化法检测核心蛋白聚糖蛋白质的表达.结果:RT-PCR检测转染组细胞核心蛋白聚糖及p21WAF/CIP1 mRNA表达的灰度比值均高于对照组(P＜0.05),Western blotting检测核心蛋白聚糖及p21WAF/CIP1蛋白质表达的灰度比值也高于对照组(P＜0.05),免疫组化检测转染组细胞核心蛋白聚糖蛋白质表达的阳性细胞计数高于对照组(P＜0.05).结论:成功建立了稳定转染核心蛋白聚糖的HepG2细胞株,并证实核心蛋白聚糖能够提高p21WAF/CIP1 mRNA和蛋白质的表达.
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