多重PCR HCV基因分型检测方法的建立及初步应用
Development and preliminary application of genotype assay of hepatitis C virus by multi-PCR
摘要目的 建立多重PCR HCV RNA基因分型的方法,并应用于临床诊断.方法 采用型特异性引物建立单管逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和双管引物特异性套式聚合酶链反应(nested-PCR)检测技术,分别对72例HCV RNA阳性的标本,设计HCV的C区特异性引物,采用Trizol提取RNA进行单管巢式PCR分型,1a、1b、2a、2b和3a在一管内扩增.结果 统计结果表明,我国丙型肝炎流行主要以1b(Ⅱ)和2a(Ⅲ)2种基因型为主,但有部分1a、2b、3a的HCV感染者检出,其中1a占1.4%(1/72),1b占68.1%(49/72),2a占13.9%(10/72),3a占1.4%(1/72),1b/2a型混合占11.1%(8/72),未分出型或其他型者为4.2%(3/72).结论 本文建立的方法具有良好的特异性和敏感性,省时、省力,方便检测,可同时区分5种HCV基因型;我国北方地区发现有1a和3a基因型感染病例.
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