换一批稳定表达细胞周期蛋白D1反义基因逆转人胃癌细胞恶性表型
Stable overexpression of cyclin D1 antisense gene reverses the transformed phenotype of human gastric cancer cells
摘要目的探讨细胞周期蛋白D1对肿瘤生物学行为的影响及用于基因治疗的可能.方法利用重组技术将人细胞周期蛋白D1 cDNA全片段克隆至亚克隆载体Bluescript-KS中.利用该载体内的T2/T3成对启动子体系,体外转录法制备正、反义细胞周期蛋白D1单链RNA探针.同时利用该载体转换酶切位点的作用,构建了人细胞周期蛋白D1反义RNA真核表达载体pDORD1AS,阳离子脂质体介导下转染胃癌细胞株,经G418筛选获得细胞周期蛋白D1反义RNA稳定表达的阳性细胞克隆.用免疫细胞化学、流式细胞仪、分子杂交、病理形态学和细胞生物学方法对该阳性细胞克隆进行检测,同时设未经转染和转染空载体胃癌细胞组作对照.结果阳性细胞克隆细胞周期蛋白D1表达较对照组减少(抑制率约为36%);细胞体积增大,核浆比例下降;细胞倍增时间延长(42.2 h比26.8 h及26.4 h),生长饱和密度下降(1.9×105比4.8×105及4.8×105),G1/G0期细胞比例增加(80.9%比64.6%及63.8%),血清依赖性有所恢复,裸鼠成瘤率下降(0/4比4/4及4/4).结论稳定表达细胞周期蛋白D1反义RNA对胃癌细胞SGC7901/VCR的恶性表型有一定的逆转作用,进一步深入的研究是有意义的.
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DOI
10.3321/j.issn:1000-5404.2001.10.024
发布时间
2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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