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H5亚型和N6亚型禽流感病毒二重RT-PCR检测方法的建立

Development of a Duplex RT-PCR for Detecting AIV H5 and N6 Subtypes

摘要为了建立一种快速、简便的H5亚型、N6亚型禽流感病毒(AIV)的检测方法,根据GenBank中H5亚型、N6亚型AIV的HA和NA基因保守序列,分别设计了2对特异性引物,通过优化条件,建立了H5亚型和N6亚型AIV二重RT-PCR检测方法.特异性试验结果显示,该方法对H5N6亚型AIV特异性扩增出418 bp和251 bp目的片段,对 H5Ny(y≠6)亚型AIV扩增出418 bp目的片段,对 HxN6(x≠5)亚型AIV扩增出251 bp目的片段,对其他亚型和常见的禽病病原体均未扩增出目的片段;敏感性结果显示,该方法对H5亚型和N6亚型最低检测限为1.59×10-5ng/μL.本研究建立的H5亚型和N6亚型AIV检测方法,具有特异性强,灵敏度高的特点,为H5亚型和N6亚型AIV临床检测以及防控提供了有效方法.

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