换一批牛冠状病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用
Establishment and Application of TaqMan Fluorescence Quantitative PCR Detection Method for Bovine Coronavirus
摘要为建立牛冠状病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法,根据GenBank收录的牛冠状病毒AKS-01株N基因序列(KU886219)保守区设计特异性引物和探针,构建重组质粒并进行反应条件优化、特异性试验、重复性试验以及敏感性试验,建立一种检测BCoV的TaqMan荧光定量PCR方法.结果显示,建立的牛冠状病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法特异性、敏感性和重复性均良好.该方法BCoV重组质粒标准品在5.75×107～5.75×103 copies/μL时与Ct值呈现良好线性关系,该方法对牛轮状病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛副流感病毒3型均无交叉反应,特异性良好;该方法对BCoV重组质粒标准品最低检测限为5.75×101 copies/μL;批内和批间重复性试验结果稳定,变异系数均小于2％.利用所建立的TaqMan荧光定量PCR方法对收集的132份样品进行检测,与常规PCR相比,两者符合率为96.21％,可为BCoV的临床检测和流行病学调查提供技术支持.
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分类号
S852.659.6
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1007-5038.2024.02.003
发布时间
2024-04-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
陕西省重点研发计划项目（2022NY-098）
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