换一批喉癌N6-甲基腺嘌呤甲基化修饰差异基因的初步筛查与验证
The initial screening and verifying of differential genes related to m6A methylation modification in laryngeal carcinoma
摘要目的 分析喉癌中N 6-甲基腺嘌呤(N 6-methyladenosine,m6A)甲基化修饰差异基因表达水平,探讨其在喉癌进展中的作用.方法 采用m6A-mRNA表观转录组芯片检测3对喉癌组织及相应癌旁组织中m6A甲基化修饰差异表达基因,并选择显著差异表达的含有6个跨膜BAX抑制子基序(transmembrane BAX inhibitor motif containing 6,TMBIM6)基因行逆转录实时定量PCR(RT-qPCR)、甲基化RNA免疫沉淀定量PCR(methylated RNA immunoprecipitation-qPCR,MeRIP-qPCR)及免疫组织化验证,最后检测其甲基化位点.结果 在差异表达基因和m6A甲基化基因的联合分析中,共获得135个高甲基化高表达基因,2958个高甲基化低表达基因,129个低甲基化高表达基因,682个低甲基化低表达基因.对显著高表达的TMBIM6基因行RT-qPCR、MeRIP-qPCR和免疫组化验证结果与基因芯片一致,鉴定出TMBIM6基因甲基化位点位于3'非编码区的2222碱基位.结论 TMBIM6基因通过m6A修饰机制在喉癌中发挥癌基因的作用,可望成为喉癌的分子标记物及潜在的治疗靶点.
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