换一批甜瓜蔗糖磷酸合成酶基因全克隆及工程载体的构建
Gene cloning of melon sucrose phosphate synthase and construction of plant engineering vector
摘要蔗糖磷酸合成酶在甜瓜果实蔗糖合成途径中起关键性的调节作用,克隆该基因并导入甜瓜低糖自交系,可改良甜瓜果实品质创新优良种质.从甜瓜幼苗叶片提取总RNA,利用RT-PCR与Southern blot方法相结合.重组子质粒经限制性内切酶酶切和PCR验证以及测序同源性比较,克隆到基因的5'(2 859 bp)和3'(852 bp).应用高保真Taq聚合酶PCR拼接蔗糖磷酸合成酶完整cDNA序列3 692 bp.该片段与GenBank中其它植物基因序列具有97％～99％的同源性,登录号DQ364058.应用BamH Ⅰ、Kpn,Ⅰ、Ggl Ⅱ限制性酶切获得植物双元表达载体pROK2及基因的线性片段,通过T4连接酶反应,构建了以CaMV35S为启动子,以Tnos为终止子的工程载体pROK-SIS.该载体含有Npt-Ⅱ选择标记基因.
更多相关知识
- 浏览0
- 被引7
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
