1,8-桉叶油素对ox-LDL诱导的巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响及机制
Effects of 1,8-Cineole on the formation of ox-LDL induced macrophage derived foam cells and its mechanism
摘要目的 探讨1,8-桉叶油素(1,8-Cineole)对氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导的巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响及机制.方法 取对数生长期的人单核细胞THP-1,使用100.00 μg/L佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)诱导分化成THP-1源性巨噬细胞,将THP-1源性巨噬细胞分为Control组(同等体积的培养基)和各浓度ox-LDL组(0.08 mg/L、0.80 mg/L、8.00 mg/L及80.00 mg/L),采用四甲基偶氮唑盐(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)实验检测ox-LDL对THP-1源性巨噬细胞的毒性;将THP-1源性巨噬细胞分为Control组和各浓度1,8-Cineole组(1.00 μmol/L、5.00 μmol/L、25.00 μmol/L、125.00 μmol/L 及 625.00 μmol/L),采用 MTT 实验检测 1,8-Cineole 对 THP-1 源性巨噬细胞活性的影响;以浓度为80.00 mg/L ox-LDL诱导THP-1源性巨噬细胞分化为泡沫细胞,将泡沫细胞分为Control组、ox-LDL 组(80.00 mg/L ox-LDL)及 1,8-Cineole 组[ox-LDL 80.00 mg/L+各浓度 1,8-Cineole(1.00 μmol/L、5.00 μmol/L、25.00 μmol/L、125.00 μmol/L 及 625.00 μmol/L)],采用 MTT 实验检测 1,8-Cineole 对 ox-LDL 诱导THP-1泡沫细胞活力的影响;80.00 mg/L ox-LDL诱导THP-1源性巨噬细胞分化为泡沫细胞模型,分为Control组(同等体积的培养基)、ox-LDL 组(80.00 mg/L ox-LDL)、低剂量 1,8-Cineole 组(80.00 mg/L ox-LDL 和1.00 μmol/L 1,8-Cineole)及高剂量 1,8-Cineole 组(80.00 mg/L ox-LDL 和 5.00 μmol/L 1,8-Cineole),采用油红O染色实验检测脂质的积累和泡沫细胞的形成情况,尼罗红染色实验检测细胞脂质摄取情况,蛋白免疫印迹(Western blot)法分析巨噬细胞中A1类清道夫受体(A1 scavenger receptor,SR-A1)蛋白的表达,实时荧光定量PCR(real time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)检测 SR-A1 信使 RNA(messenge RNA,mRNA)的表达.结果 与Control 组比较,0.08~80.00 mg/L ox-LDL 组和 1.00~125.00 μmol/L 1,8-Cineole 组对 THP-1 巨噬细胞均无毒性(P>0.05);与 ox-LDL 组比较,625.00 μmol/L 1,8-Cineole 组细胞活力降低(P<0.05);与 Control组比较,ox-LDL组细胞的脂滴含量增多(P<0.05),脂质的荧光强度增加(P<0.05),SR-A1蛋白和mRNA的表达增加(P<0.05);与ox-LDL组比较,低剂量和高剂量1,8-Cineole组巨噬细胞内脂滴减少(P<0.05),脂质的荧光强度、降低SR-A1蛋白和mRNA的表达减少(P<0.05).结论 1,8-Cineole可抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞源性泡沫细胞的形成,其机制可能与SR-A1的表达下降有关.
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