换一批急性髓系白血病细胞单链DNA适体的体外筛选
In vitro selection of single strand deoxyribonucleic acid aptamers binding to cells from patients with acute myeloblastic leukemia
摘要目的:筛选识别急性髓系白血病M2型(acute myeloblastic leukemia M2 subtype,AML-M2) CD33+/CD34-细胞的核酸适体(aptamers).方法:以AML-M2型白血病CD33+/CD34-细胞为靶细胞,正常人CD33+/CD34-细胞为反筛选细胞,采用细胞-指数富集配体系统进化(cell-systematic evolution of ligands by exponential enrichment,C-SELEX)技术,体外反复筛选单链DNA( single strand deoxyribonucleic acid,ssDNA)文库的适体,经聚合酶链式反应(polymerasechain reaction,PCR)扩增产生次级文库.然后将最终轮次的次级ssDNA文库克隆、测序并分析各适体的一级和二级结构.结果:琼脂糖凝胶电泳结果显示:每轮筛选出来的次级ssDNA文库PCR扩增产物均可见到清晰的DNA条带.经过13轮的反复筛选,次级ssDNA文库与细胞结合的荧光强度从2.14％上升到51.12％,至第13轮趋于稳定状态.对30个克隆子序列测定结果显示:22个适体一级结构分别含有AAGTA,TATCT,AGATG和AAATT 4个保守序列,另8个适体无此保守序列.二级结构模拟结果显示:30个适体含有4种不同的茎环、凸环模拟结构.结论:C-SELEX技术可用于急性髓系白血病原代细胞适体的筛选,筛选到的AML-M2型白血病CD33+/CD34-细胞适体有望用于白血病的诊断与治疗.
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