酵母双杂交技术筛选克隆HCV核心蛋白结合蛋白基因1-论文-万方医学网

酵母双杂交技术筛选克隆HCV核心蛋白结合蛋白基因1

Screening and Cloning of gene of hepatocyte protein 1 interacting with HCV core protein

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摘要：

目的克隆与丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白结合的肝细胞中的未知蛋白基因方法应用酵母双杂交系统3构建HCV核心蛋白诱饵质粒,转化酵母AH109后与含文库质粒的酵母Y187进行配合,在营养缺陷培养基上进行双杂交筛选.筛选出30个阳性克隆,对既能在4缺营养缺陷培养基上生长(SD/-Trp-Leu-Ade-His)又能在涂有X-α-半乳糖(X-α-gal)的四缺培养平皿上长出蓝色菌落,提取此酵母克隆的质粒转化大肠杆菌后进行测序,进行生物信息学分析.将HCV核心蛋白基因分为大、中、小三段,与所克隆的未知功能基因回交,以证实其相互作用的部位.结果分析的结果显示,其中1号克隆的测序结果与GenBank中的1个未知功能序列有99%的同源性,初步证明了此基因与HCV核心蛋白有结合活性(GenBank号:AY032593).HCV核心蛋白的全长、2/3,1/3三段,回交显示三段均能在酵母中与此未知基因具有结合作用.结论 HCV核心蛋白结合蛋白肝细胞基因克隆成功,核心蛋白与此未知基因的作用部位应是氨基端.此项研究结果,为以后研究此基因在HCV致病机制以及在肝细胞中的生理功能提供了线索.

作者：李克 ^[1] 王琳 ^[1] 成军 ^[1] 李莉 ^[1] 钟彦伟 ^[1] 陈菊梅 ^[1] 张玲霞 ^[1] 段惠娟 ^[1] 陆荫英 ^[1] 杨继珍 ^[1] 刘妍 ^[1] 洪源 ^[1] 夏小兵 ^[1] 王刚 ^[1] 董菁 ^[1]

作者单位：中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研院中心 ^[1]

期刊：《世界华人消化杂志》2001年9卷12期 1379-1383页 ISTIC

关键词： C型肝炎样病毒属/遗传学病毒蛋白质类/遗传学基因,病毒克隆,分子遗传学技术

主题词：蛋白(Egg White)基因(Genes)病毒(Viruses)遗传学(Genetics)肝炎(Hepatitis)

分类号： R511

栏目名称： 研究原著

DOI： 10.3969/j.issn.1009-3079.2001.12.007

发布时间： 2006-07-31

基金项目：

国家自然科学基金

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