乙型肝炎病毒X基因酵母表达载体构建及表达-论文-万方医学网

乙型肝炎病毒X基因酵母表达载体构建及表达

Cloning and expression of hepatitis B virus X gene in yeast

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摘要：

目的:为进一步探讨乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白(HBxAg)的功能,在真核生物酵母细胞中表达X基因.方法:用多聚酶链反应(PCR)的方法以HBV ayw亚型全序质粒pCP10为模板扩增X基因,克隆到pGEM-T载体中扩增并测序鉴定,EcoRI和PstI双酶切后回收连接到酵母表达载体pGBKT-7中并转化酵母AH109,色氨酸缺陷型培养基(SD/-Trp)上筛选阳性菌落.提取酵母蛋白质,进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western免疫印迹分析,以明确HBxAg是否在其中表达.结果:成功地扩增出HBx基因,测序鉴定符合Gene Bank报告序列;酶切回收的HBx基因成功地克隆入酵母表达载体pGBKT-7并转化入酵母细胞AH109中,Western免疫印迹显示X基因在酵母细胞中表达,表达产物在胞内存在,相对Mr为35000左右结论:成功地构建了HBxAg在酵母表达载体,并在酵母细胞中表达

作者：陆荫英 ^[1] 李克 ^[1] 成军 ^[1] 王琳 ^[1] 刘妍 ^[1] 段惠娟 ^[1] 张玲霞 ^[1]

作者单位：中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心,北京市,100039 ^[1]

期刊：《世界华人消化杂志》2002年10卷1期 15-18页 ISTIC

主题词：基因(Genes)乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus)细胞(Cells)蛋白(Egg White)方法(Methods)

分类号： R511

栏目名称： 研究原著

DOI： 10.3969/j.issn.1009-3079.2002.01.005

发布时间： 2006-07-31

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被引：56
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