乙型肝炎病毒前-S2蛋白结合蛋白基因S2-29的克隆化研究-论文-万方医学网

乙型肝炎病毒前-S2蛋白结合蛋白基因S2-29的克隆化研究

Screening and identification of a novel gene coding for hepatitis B virus pre-S2 antigen interacting protein S2-29

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摘要：

目的:筛选人肝细胞中与乙型肝炎病毒(HBV)前-S2蛋白(Pre-S2)相互作用的蛋白,探寻HBV致病机制.方法:用多聚酶链反应(PCR)技术扩增HBV前-S2基因,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AHl09并在其内表达,然后与转化了人肝cDNA文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,用营养缺陷型培养基及蓝白斑双重筛选阳性菌落,提取酵母质粒转化大肠杆菌并测序,进行生物信息学分析.逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法从HepG2细胞的mRNA中扩增出完整的新基因S2-29,连入另一酵母表达载体pGADT7,并用免疫共沉淀方法再次证实二者间的相互作用.结果:成功克隆出HBV前-S2基因并在酵母细胞中表达,配合后筛选出既能在四缺(SD/-Trp-Leu-His-Ade)培养基又能在铺有X-α-半乳糖(X-α-gal)的四缺培养基上生长并变成蓝色的真阳性菌落26个,其中有1个未知基因S2-29,该基因能在HepG2细胞中表达,免疫共沉淀方法证实二者在体外也有结合作用.结论:成功克隆出与乙型肝炎病毒前-S2蛋白相结合的新基因,为进一步研究HBV前-S2的作用提供了新线索.

作者：陆荫英 ^[1] 陈天艳 ^[1] 成军 ^[1] 梁耀东 ^[1] 王琳 ^[1] 刘妍 ^[1] 李克 ^[1] 张健 ^[1] 邵清 ^[1] 张玲霞 ^[1]

作者单位：中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室,北京市,100039 ^[1]

期刊：《世界华人消化杂志》2003年11卷8期 1114-1117页 ISTIC

主题词：蛋白(Egg White)基因(Genes)乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus)研究(Research)细胞(Cells)

分类号： R511

栏目名称： 病毒性肝炎

DOI： 10.3969/j.issn.1009-3079.2003.08.008

发布时间： 2006-07-31

基金项目：

国家自然科学基金 军队科技攻关项目 军队杰出人才基金 军队科技攻关项目 军队科技攻关项目

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被引：5
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