摘要目的 建立莱姆病螺旋体中国株5种基因型(巴伐利亚疏螺旋体、伽氏疏螺旋体、阿弗西尼疏螺旋体、狭义伯氏疏螺旋体和扬子疏螺旋体)的标准菌株,为菌株鉴定、诊断试剂和疫苗研发提供基础.方法 依据《病原微生物菌(毒)种国家标准株评价技术标准》(WS/T 812-2022),针对中国莱姆病螺旋体5种主要基因型,选取5株菌株(PD91、MD86、FP1、CS4和QX-S13).首先接种到BSK Ⅱ培养基中培养,暗视野显微镜下观察菌株的形态学特点.提取全基因组DNA,聚合酶链式反应扩增莱姆病螺旋体5S～23S rRNA基因间隔区并测序,将每株菌株不同代次培养物的产物序列分别进行比对分析.随后使用多位点序列分析(MLSA)方法鉴定菌株基因型,同时将不同代次菌株MLSA聚类分析结果进行比对,验证菌株遗传学稳定性.通过Illumina NovaSeq平台进行全基因组测序分析菌株基因组特征.结果 5株菌株均具有莱姆病螺旋体典型形态学特征.经特异性基因检测及MLSA分型鉴定,依次为巴伐利亚疏螺旋体(PD91),伽氏疏螺旋体(MD86),阿弗西尼疏螺旋体(FP1),狭义伯氏疏螺旋体(CS4)和扬子疏螺旋体(QX-S13)基因型,聚类分析显示与相应基因型国际参考菌株位于同一分支.稳定性实验结果显示5株菌株不同代次培养物5S～23S rRNA基因间隔区序列相似性达到100.00％,5株菌株10代次和20代次培养物MLSA聚类分析结果一致,遗传学稳定性良好.全基因组测序结果显示,基因组大小为1.26Mbp～1.80 Mbp,G+C含量为27.63％～28.20％,基因组功能和生物代谢模块分布基本相同,主要为维持细菌生长、繁殖、运动和应激等相关成分.结论 PD91、FP1、MD86、CS4和QX-S13共5株菌株具有莱姆病螺旋体典型生物学、形态学特征,基因型及分子特征稳定,可作为中国莱姆病螺旋体5种基因型的标准菌株.本研究可为建立中国莱姆病螺旋体标准化菌株体系提供基础,同时为菌株鉴定、莱姆病诊断试剂和疫苗研发提供相关资源.