换一批CKS2shRNA慢病毒表达载体的构建及其抑制卵巢癌A2780细胞增殖
Construction of lentivirus expression vector of shRNA targeting at CKS2 gene and its inhibition on A2780 cell proliferation
摘要目的 构建靶向CKS2的shRNA慢病毒表达载体,并探讨CKS2敲除对卵巢癌细胞A2780增殖的影响.方法 根据siRNA原理设计两对靶向CKS2的shRNA序列(shRNA1、shRNA2)及阴性对照NC shRNA,并克隆到慢病毒表达载体PL-KO.1/puro中;将上述质粒转染到293T细胞并包装出慢病毒,用慢病毒感染卵巢癌细胞A2780,实时定量PCR及Westernblot检测CKS2表达;MTT法检测A2780细胞增殖;Western blot检测PARP-1的剪切;流式细胞术检测凋亡.结果 成功构建CKS2 shRNA慢病毒表达载体能明显降低A2780细胞中CKS2 mRNA及蛋白表达(P＜0.05);能显著抑制A2780靶向CKS2的shRNA慢病毒表达载体,并包装出慢病毒;感染A2780细胞后,细胞增殖受抑(P＜0.05);能诱导PARP-1蛋白的剪切及凋亡(P＜0.05).结论 成功构建靶向CKS2的shRNA慢病毒表达载体,能显著抑制A2780细胞增殖.
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医学主题词
细胞增殖(Cell Proliferation)病毒(Viruses)卵巢肿瘤(Ovarian Neoplasms)细胞(Cells)选择性剪接(Alternative Splicing)
分类号
R737.9（泌尿生殖器肿瘤）
栏目名称
发布时间
2016-03-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（81550029）
国家自然科学基金（30800410）
三峡大学人才启动基金（KJ2014B064）
湖北省自然科学基金（2015CFB198）
国家级大学生科技创新项目（2015YCX004）
三峡大学教学研究重点项目（J2015023）
肿瘤微环境与免疫治疗湖北省重点实验室(三峡大学)开放基金课题（2015KZL02）
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