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丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活SV40病毒早期启动子的研究

The study of transactivating effect of HCV NS5A protein on SV40 early promoter

摘要:

目的:探讨丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS5A的反式激活作用. 方法:扩增HCV NS5A基因,构建HCV NS5A基因真核表达载体pcDNA3.1(-)-NS5A;并转染肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞,免疫印迹方法检测转染细胞中HCV NS5A蛋白的瞬时表达;与报告质粒pCAT3-promoter共转染HepG2细胞,用酶联免疫吸附方法检测细胞中氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性. 结果:质粒pcDNA3.1(-)-NS5A在HepG2细胞瞬时表达HCV NS5A蛋白,共转染实验中pcDNA3.1(-)-NS5A组的CAT表达活性是空质粒对照组的 3.8 倍. 结论:构建的表达载体能在哺乳动物细胞中表达出相应蛋白,并能够反式激活SV40病毒早期启动子.本研究为进一步克隆HCV NS5A蛋白反式激活的靶基因,深入阐明HCV NS5A蛋白致肝细胞癌发生的分子生物学机制提供依据.

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